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生物化學實驗
組別：3
組员：94451110游綉文 94451118廖如瑩 94451141黃婉蓉94451142李俊杰
94451139吳小媚 94451133黃寶進92451143曾廷嘉
學號: 94451143 蔡莉君
實驗名稱：SDS-PAGE 蛋白質變性電泳
實驗日期：11月1號
研究目的：以電塲作為蛋白質移動的動力，將蛋白質在SDS-PAGE下進行分離。並比照標準品蛋白質於膠體上之移動距離作成標準曲線，以計算蛋白質的分子量。
實驗材料及配方：8 % Separating Gels 、5 % Stacking Gels
研究方法：步驟(一)
(1)組合電泳玻片組
(2)灌注separating gel , 靜置凝固
(3)灌注staking gel, 插入comb , 靜置凝固（膠體需灌滿，不可有氣泡）
步驟(二) 樣品製備
1.in取8 ul (1mg/ml)蛋白質(BSA)+ 2 ul loading Buffer
2.分別放入1（marker）2（BSA）
3.在放入熱水浴 5 m，使蛋白質變性
步驟(三)垂直電泳
1.電泳液 (10 倍 Buffer) ，須先稀釋10倍後即可使用
Tris Base 30 g
Glycine 144 g
SDS 10 g
Add H2O to 1 Liter（須以200V電泳直至dye跑至膠體的底部）
步驟(四)膠片染色
1.染劑(Coomassie Blue R-250 0.1 g+ 45ml methanol+ 10 ml glacial acetate+H2O 45 ml)以染劑染色 20 min
2.以退染劑退染 50 min(100ml methanol+ 100 ml glacial acetate+H2O 800 ml)
結果討論：1.什麼是SDS膠體電泳?
SDS-PAGE 是在電泳系統中，利用界面活性劑 SDS (sodium dodecyl sulfate) 附在蛋白質疏水區表面，由 SDS 本身所帶之負電荷引導泳動。 由於蛋白本身所帶電荷遠小於附著之 SDS 分子，因此蛋白質本身的電荷對泳動率沒有影響，泳動率只決定於蛋白質分子量，故 SDS 電泳適合測定蛋白質的分子量。 在樣本處理過程中，利用加熱破壞蛋白質的三級及四級結構，使其分子內部的疏水區暴露而與 SDS 結合；加入還原劑可破壞蛋白質分子內的雙硫鍵，常用還原劑有 b-mercaptoethanol 或 dithiothreitol。 因此 SDS-PAGE 廣泛地應用於蛋白質次單元體分子量的決定。
參考資料：曾雅秀教授教學資料
google、奇魔網頁